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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Cell Cycle Staining Kit

產(chǎn)品中文名稱：細(xì)胞周期染色分析試劑盒

規(guī)格：50T/100T

貨號(hào)：EY-01X8548
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

•  流式分析：細(xì)胞周期狀態(tài)

•  提供即用型細(xì)胞染色試劑

•  通用的檢測(cè)通道：Ex/Em=535/615 nm.

保存建議:自發(fā)貨之日起，在推薦溫度下至少穩(wěn)定12個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

細(xì)胞周期是指連續(xù)分裂細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個(gè)過(guò)程。在這個(gè)過(guò)程中，細(xì)胞遺傳物質(zhì)復(fù)制并加倍，且在分裂結(jié)束時(shí)平均分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去。細(xì)胞周期又可以分為間期和有絲分裂期，細(xì)胞間期常劃分為休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整個(gè)周期可表示為G1→S→G2→M。DNA周期檢測(cè)可用來(lái)反應(yīng)細(xì)胞周期的各個(gè)期的狀況，即細(xì)胞增殖狀況。隨著細(xì)胞在細(xì)胞周期中的進(jìn)展，G1期細(xì)胞具有一組配對(duì)的染色體，并且就DNA含量而言是均一的。 另一方面，在S期期間DNA的量開始加倍，因此DNA的量是G1中的量的1-2倍。 與G1中的細(xì)胞和兩組配對(duì)的染色體相比，

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.1mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(1-39) 促腎上腺皮質(zhì)激素(1-39)(抗原)

FCGR3B Protein Human 重組人 CD16b / FCGR3B 蛋白

KIRREL3重組小鼠 KIRREL3 / NEPH2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

IL2RG Protein Rat 重組大鼠 IL2RG / CD132 蛋白

APOL1重組人 APOL1 / apolipoprotein L1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

小鼠對(duì)基苯(PABA)ELISA 試劑盒

Human acidic fibroblast growth factor 1 (aFGF-1) ELISA Kit 人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1(aFGF-1)檢測(cè)試劑盒

Humanplatelet-associatedCompleme3,PAC3ELISAKit 人血小板相關(guān)補(bǔ)體3(PAC3)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanAquaporin4,AQP-4檢測(cè)試劑盒人水通道蛋白4(AQP-4)檢測(cè)試劑盒

植物異檸檬酸脫氫酶(isociatedehydrogenase;IDH)電泳分析試劑盒5次

Humahyroxine，T4ELISAKit人甲狀腺素(T4)檢測(cè)試劑盒

(Cytochrome C)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

CXC 趨化因子受體 1(CXCR1)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

CXCR3(CXCR-3)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

人 CXCL-11(I-TAC)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

大鼠尾加壓素2受體(S2R)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： S2R ELISA Kit

Mouse fibroblast growth factor 1 (aFGF-1) ELISA Kit 小鼠酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1(aFGF-1)檢測(cè)試劑盒

MouseIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit 小鼠白介素2受體(IL-2R)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHSCCAg-2(umanSquamousCellCarcinomaAigen2)ELISAKit人鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原2

細(xì)胞NLK激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitβ-EP大鼠β內(nèi)啡肽

細(xì)胞周期染色分析試劑盒PTN重組小鼠 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白  Protein

催乳素誘導(dǎo)蛋白(PIP)重組蛋白 Recombinant Prolactin Induced Protein (PIP)

CD22重組人 Siglec-2 / CD22 蛋白 (aa 176-687, His 標(biāo)簽) Protein

FCGR3B Protein Human 重組人 CD16b / FCGR3B 蛋白

KLRK1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 NKG2D / KLRK1 蛋白 (aa 78-216, His 標(biāo)簽)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。