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產(chǎn)品名稱:488/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒

產(chǎn)品特點:488/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒的相關產(chǎn)品:CTGF (connective tissue growth factor 0.5mgCTGF (connective tissue growth factor) 結(jié)締組織生長因子(多肽抗原)
FTL Protein Human 重組人 FTL / ferritin, light polypeptide 蛋白

產(chǎn)品型號:

更新日期:2024-11-19

訪問次數(shù):4

488/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒的詳細資料:

產(chǎn)品僅供研究使用,不適用于人類或臨床診斷
商品屬性:

產(chǎn)品英文名稱:Annexin V-AbFluor  488/PI Apoptosis Detection kit

產(chǎn)品中文名稱:488/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒

規(guī)格:50T/100T

貨號:EY-01X8544
用途:僅供科研研究實驗

特點&優(yōu)勢:

AbFluor  488 FITC的替代物,不僅熒光強度和光穩(wěn)定性更好,而且不受pH的影響

  Annexin V- AbFluor  488: Ex/Em = 491/517 nm; PI: Ex/Em = 535/617 nm (DNA染料)

  適用于流式細胞術(shù)和熒光顯微鏡

保存建議:-20℃,避光保存12個月。

運輸條件:藍冰運輸

背景

細胞凋亡(apoptosis)是一種基本生物學現(xiàn)象,指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡,在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。在正?;罴毎?,磷脂酰(PS)位于細胞膜的內(nèi)側(cè),而在細胞凋亡的早期,PS可從細胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細胞膜的表面,暴露在細胞外環(huán)境中。膜聯(lián)蛋白V(Annexin V) 是一種分子量為35~36KDa的鈣離子依賴型磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力特異性結(jié)合。通過熒光素或者標記Annexin V即可簡單快速地直接檢測出細胞早期凋亡情況。 碘化丙啶(propidine iodide,PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,而早期凋亡細胞的細胞膜是完好的,對PI有拒染性。但在凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能透過細胞膜而使細胞核染上。因此將Annexin V PI 匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。PI可以被488,532546nm激光線激發(fā),并發(fā)出紅色熒光。

488/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒

本產(chǎn)品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷??芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品:

A/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine 0.5mgA/H1N1-M2 Swine(Avian influenza Matrix Protein-2 Swine) A型豬流感病毒H1N1-M2蛋白

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細菌色酶原位染色檢測試劑盒20

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真菌/酵母酸性0酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒20

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蛋白激酶Cδ(PKCδ)重組蛋白 Recombinant Protein Kinase C Delta (PKCd)

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IL21R Protein Human 重組人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白

FGFR4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 (Fc 標簽)

操作步驟:

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。

(四)誘導表達

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。


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