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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：LDH Cytotoxicity Assay Kit

產(chǎn)品中文名稱：細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒（乳酸脫氫酶法）

規(guī)格：96 T/480T

貨號(hào)：EY-01X8524
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

•  分析化合物或環(huán)境因素對(duì)細(xì)胞死亡的作用。

•  LDH從細(xì)胞內(nèi)被釋放到培養(yǎng)基中，形成了一個(gè)可視化的顏色反應(yīng)。

•  檢測(cè)范圍：10,00-100,0000個(gè)細(xì)胞/孔。

保存建議:建議收到貨后避光保存于-20°C，有效期為6個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

對(duì)細(xì)胞死亡或細(xì)胞毒性的評(píng)估往往是基于細(xì)胞質(zhì)膜損傷來定量的。 LDH是一種穩(wěn)定的酶，存在于所有細(xì)胞類型中，并且在質(zhì)膜損傷后迅速釋放到細(xì)胞培養(yǎng)基中。 因此，LDH是細(xì)胞毒性研究中使用廣泛的標(biāo)記物。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷。可直接加入到檢測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

10(KLK10)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 10 (KLK10)

CA13 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase XIII / CA13 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CTSH重組小鼠 Cathepsin H / CTSH 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CA9 Protein Canine 重組狗 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白 (His 標(biāo)簽)

TMUB2重組人 TMUB2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

魚雌二醇(E2)ELISA 試劑盒

Human rheumatoid ahritis associated nuclear aigen aibody (RANA) ELISA Kit 人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)核抗原抗體(RANA)檢測(cè)試劑盒

Humanadiponectin,ADPELISAKit 人脂聯(lián)素(ADP)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforADMELISAKit大鼠腎上腺髓質(zhì)素

血液乙酰酯酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

MouseReninELISAKit小鼠腎素(Renin)檢測(cè)試劑盒

抑瘤素   英文名稱：    M   規(guī)格：      英文縮寫：   OSM

骨鈣素   英文名稱：   Osteocalcin   規(guī)格：      英文縮寫：   OC

催產(chǎn)素   英文名稱：   Oxytocin   規(guī)格：      英文縮寫：   OT

氧化低密度脂蛋白   英文名稱：   oxidized low density lipoprotein   規(guī)格：      英文縮寫：   OxLDL

大鼠干細(xì)胞因子受體(SCFR)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： SCFR ELISA Kit

Rabbit follicle stimulating hormone (FSH) ELISA Kit 兔子促卵泡素(FSH)檢測(cè)試劑盒

肉毒桿菌(A/B型)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMethylase(MouseMethylase)ELISAKit小鼠甲基化酶

體液牛病毒性腹瀉病毒II型(BovineViralDiarrhoeaVirus-2;BVDV-2)定性試劑盒20次

ELISAKitMT牛金屬硫蛋白

細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒（乳酸脫氫酶法）CTSH重組小鼠 Cathepsin H / CTSH 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

10(KLK10)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 10 (KLK10)

TMUB2重組人 TMUB2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CA13 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase XIII / CA13 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CA9 Protein Canine 重組狗 Carbonic Anhydrase IX / CA9 蛋白 (His 標(biāo)簽)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。