蕎麥源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒檢測步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
HEC-1A, 人子宮內膜癌細胞系
Caki-1, 人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞
Ishikawa, 人子宮內膜癌細胞系
ACHN, 人腎細胞腺癌細胞
JEC, 人子宮內膜腺癌細胞系
BPH-1, 人前列腺增生細胞
RL95-2, 人子宮內膜腺癌細胞系
Ca Ski, 人宮頸癌細胞
MCF-7 [MCF7], 人乳腺癌細胞系
Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞
GBC-SD, 人膽囊癌細胞
5637, 人膀胱癌細胞
CNE1, 人鼻咽癌細胞系
HT-29, 人結腸癌細胞
T24, 人膀胱癌細胞
5-8F, 人高轉移鼻咽癌細胞系
HCT116, 人結直腸癌細胞
LncaP, 人前列腺癌細胞
6-10B, 人鼻咽癌細胞系
lovo, 人結腸癌細胞
DU 145, 人前列腺癌細胞
Hep-2, 人喉癌細胞系
MDA-MB-231, 人乳腺癌細胞