抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒結合物即酶標記的抗體(或抗原),是ELISA中zui關鍵的試劑。良好的結合物應該是既保有酶的催化活性,也保持了抗體(或抗原)的免疫活性。結合物中酶與抗體(或抗原)之間有恰當的分子比例,在結合試劑中應盡量不含有或少含有游離的(未結合的)酶或游離的抗體(或抗原)。此外,結合物尚要有良好的穩(wěn)定性。
用于ELISA的酶應符合以下要求:純度高,催化反應的轉化率高,專一性強,性質穩(wěn)定,來源豐富,價格不貴,制備成酶結合物后仍繼續(xù)保留它的活性部分和催化能力。在受檢標本中不存在相同的酶。另外,它的相應底物易于制備和保存,價格低廉,有色產物易于測定等。 在ELISA中,常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和堿性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP)。在少數商品ELISA試劑中,應用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。 國產ELISA試劑一般都用HRP制備結合物。HRP是一種糖蛋白,含糖量約為18%,分子量為44000,是一種復合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結合而成,是一種卟啉蛋白質。主酶無色糖蛋白在275nm波長處有吸收峰,輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán),在403nm波長處有吸收峰。HRP的純度用RZ(Reinheit Zahl,德文,意為純度數)表示,是403nm的吸光度與280nm吸光度之比,高純度的HRP的RZ≥9.0。 HRP除符合上述的ELISA中標記酶的要求外,更有價格低廉和性質較穩(wěn)定的特點。值得注意的是,在選用酶制劑時,除其純度RZ外,更應注意酶的活力。高純度的酶如保存不當,活力也會降低。酶制劑的活力以所含的酶活力單位表示,可用對底物作用后生成產物量的測定進行試驗。
國外很多抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒試劑采用堿性磷酸酶(AP)作為標記酶。常用的AP有兩個來源,分別從大腸桿菌和小牛腸膜中提取。不同來源的酶生化特性特性略不相同,從大腸桿菌中提取的AP分子量為80000,酶作用的pH為8.0;用小牛腸膜中提取的AP分子量為100000,zui適pH為9.6。在ELISA中,AP系統的敏感度一般高于HRP系統,空白值也較低,但AP價格昂貴,制備結合物所得率也較HRP低。
300mg 78439-06-2 五水合物標準品 Ceftazidime Pentahydrate
300mg 類姜黃素標準品 Curcuminoids
300mg 5870-29-1 鹽酸環(huán)噴托酯標準品 Cyclopentolate Hydrochloride
300mg 2438-32-6 馬來酸右標準品 Dexchlorpheniramine Maleate
300mg 562-10-7 琥珀酸多西拉敏標準品 Doxylamine Succinate
300mg 8067-24-1 甲磺酸雙氫麥角堿標準品 Ergoloid Mesylates
300mg 13517-23-2 依替膦酸鈉相關物質A標準品 Etidronate Disodium
300mg 75607-67-9 標準品 Fludarabine Phosphate
抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒
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