本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中肺炎病毒（PVM）表達。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠肺炎病毒（PVM）表達。用純化的大鼠肺炎病
毒（PVM）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中肺炎病毒（PVM）相結(jié)合，經(jīng)洗
滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的肺炎病毒（PVM）抗體結(jié)合，形成抗體
抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化
成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），
與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中大鼠肺炎病毒（PVM）的存在與否。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液
2 酶標(biāo)試劑
3 酶標(biāo)包被板
4 樣品稀釋液
5 顯色劑 A 液
6 顯色劑 B 液
標(biāo)本要求
20ml×1 瓶
6ml×1 瓶
12 孔×8 條
6ml×1 瓶
6ml×1 瓶
6ml×1/瓶
7 終止液
8 陽性對照
9 陰性對照
10 說明書
11 封板膜
12 密封袋
6ml×1 瓶
0.5ml×1 瓶
0.5ml×1 瓶
1 份
2 張
1 個
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50!l。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40!l，然后再加待測樣品 10!l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50!l，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50!l，再加入顯色劑 B50!l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50!l，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程
計算和結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為肺炎病毒（PVM）陰性
陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為肺炎病毒（PVM）陽性
。
注意事項
1．操作嚴(yán)格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
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